Plásmido CRISPR de Activación (h) Pim-3: sc-402784-ACT

PIM3 codifica Pim-3, una quinasa de serina/treonina constitutivamente activa de la familia PIM que integra señales de citocinas y factores de crecimiento para regular la progresión del ciclo celular, las vías de supervivencia y el metabolismo celular. Pim-3 modula el control dependiente de la fosforilación de programas apoptóticos y proliferativos, e interactúa con rutas como JAK/STAT y redes asociadas a PI3K/AKT que influyen en la transcripción y la traducción. Se ha descrito una expresión aberrante de PIM3 en múltiples contextos tumorales y con frecuencia se evalúa junto con lecturas de respuesta al estrés e integridad mitocondrial. En modelos de biología inmunitaria y del cáncer, Pim-3 se utiliza para estudiar la plasticidad de la señalización impulsada por quinasas, el equilibrio proliferación–apoptosis y el crosstalk entre vías que sostiene fenotipos adaptativos.

Pim-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PIM3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Pim-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PIM3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PIM3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Pim-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PIM3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Pim-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Pim-3 en células tumorales con expresión de PIM3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.