PICH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407026

Übersicht

ERCC6L kodiert PICH, eine ATP-abhängige DNA-Translokase der SNF2-Familie, die während der Anaphase an ultrafeinen DNA-Brücken lokalisiert und eine korrekte Chromosomentrennung fördert. PICH wirkt mit Signalwegen der DNA-Schadensantwort und der Dekatenierung zusammen, indem es Chromatin umstrukturiert und die Auflösung miteinander verflochtener Schwesterchromatiden koordiniert, wodurch die Genomstabilität unter Replikationsstress unterstützt wird. Durch die Regulation des mitotischen Fortschreitens und die Verhinderung fehlerhafter Chromosomenverteilung beeinflusst PICH zelluläre Folgen, die mit Aneuploidie und genomischer Instabilität verknüpft sind. Eine fehlregulierte ERCC6L/PICH-Aktivität wurde mit proliferativen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird im Kontext der Krebsbiologie sowie anderer Erkrankungen der Genomerhaltung untersucht.

Das PICH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ERCC6L-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ERCC6L-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ERCC6L nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PICH-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ERCC6L-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PICH-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ERCC6L-Exone abzielen, die für die PICH-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ERCC6L-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PICH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PICH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ERCC6L-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PICH HDR-Plasmid (h) und PICH HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ERCC6L-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ERCC6L-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.