PI 4-kinase II α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405423

Visão geral

PI4K2A codifica a fosfatidilinositol 4-quinase II alfa (PI 4-quinase II alfa), uma quinase lipídica associada à membrana que gera fosfatidilinositol 4-fosfato (PI4P) para sustentar a sinalização por fosfoinositídeos e a identidade de membranas. O PI4P produzido por PI4K2A contribui para o tráfego no Golgi e em endossomos, para a triagem mediada por clatrina e para a conversão subsequente de fosfoinositídeos, que influencia o transporte de receptores e a dinâmica de sinalização. Por meio desses papéis na biogênese de vesículas e na remodelação de membranas, PI4K2A é relevante para estudos de organização do sistema endomembranar, detecção de nutrientes e respostas ao estresse. Alterações no metabolismo de fosfoinositídeos e em programas de tráfego associados a PI4K2A têm sido vinculadas a mecanismos implicados na biologia do câncer, na neurobiologia e nas interações hospedeiro–patógeno.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PI 4-kinase II α (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PI4K2A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PI4K2A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PI4K2A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PI 4-kinase II α.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PI4K2A para a investigação da sinalização de PI 4-kinase II α, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PI4K2A críticos para a função PI 4-kinase II α
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PI4K2A para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PI 4-kinase II α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PI 4-kinase II α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PI4K2A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PI 4-kinase II α Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PI 4-kinase II α (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PI4K2A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PI4K2A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.