PI 3-kinase p55γ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402964-ACT

PIK3R3 codifica a subunidade regulatória p55γ da fosfoinositídeo 3-quinase (PI3K) de classe IA, que se associa a isoformas catalíticas p110 para transmitir sinais de tirosina-quinases de receptor ativadas e de proteínas adaptadoras para a produção, a jusante, de segundos mensageiros lipídicos. Por meio da geração de PIP3, a sinalização de PI3K coordena a atividade do eixo AKT–mTOR, influenciando o crescimento, a sobrevivência e o metabolismo celulares, bem como a dinâmica do citoesqueleto. A regulação alterada de componentes da via PI3K, incluindo subunidades regulatórias que ajustam a saída da quinase e o acoplamento ao receptor, é frequentemente investigada em contextos como sinalização oncogênica, respostas à insulina/IGF e programas de adaptação ao estresse. Assim, PIK3R3 é estudado por sua contribuição para a amplitude da via e para o controle por feedback, que pode moldar fenótipos relevantes para transformação, proliferação e plasticidade de sinalização.

PI 3-kinase p55γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIK3R3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PI 3-kinase p55γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIK3R3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIK3R3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PI 3-kinase p55γ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIK3R3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PI 3-kinase p55γ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PI 3-kinase p55γ em células tumorais com expressão de PIK3R3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.