PGK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401288-ACT

O gene humano **PGK1** codifica a fosfoglicerato quinase 1, uma enzima-chave da glicólise que catalisa a conversão geradora de ATP de 1,3-bisfosfoglicerato em 3-fosfoglicerato. Por ocupar uma posição central no metabolismo da glicose, a PGK1 influencia a bioenergética celular, o equilíbrio redox e a adaptação metabólica em condições de hipóxia, integrando-se a vias como glicólise/gliconeogênese e programas transcricionais regulados por HIF. Alterações na expressão e na atividade de PGK1 têm sido associadas à reprogramação metabólica em estados proliferativos e à deficiência hereditária de PGK1, que pode afetar tecidos com alta demanda energética. Como um locus de expressão constitutiva comumente usado em biologia molecular e como um nó do metabolismo energético, PGK1 é um alvo útil para estudar fluxo metabólico e regulação gênica.

PGK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PGK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PGK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PGK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PGK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PGK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PGK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PGK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PGK1 em células tumorais com expressão de PGK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.