PGD synthase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405437-ACT

O HPGDS humano codifica a prostaglandina D sintase hematopoética (PGD sintase), uma enzima dependente de glutationa que converte a prostaglandina H2 em prostaglandina D2 (PGD2). A PGD2 é um mediador lipídico bioativo que sinaliza por meio dos receptores DP1/DP2 e é ainda metabolizada em prostaglandinas ciclopentenonas, conectando a atividade do HPGDS ao metabolismo de eicosanoides, à sinalização inflamatória e a programas celulares sensíveis ao estado redox. A expressão de HPGDS é proeminente em linhagens imunes e mieloides e tem sido estudada no contexto de inflamação alérgica, respostas imunes das vias aéreas e da pele, e processos neuroinflamatórios. Alterações no fluxo da via de PGD2 podem influenciar o recrutamento de leucócitos, redes de citocinas e a remodelação tecidual, tornando o HPGDS um nó útil para estudos mecanísticos de fenótipos de doença associados à inflamação.

PGD synthase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HPGDS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PGD synthase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HPGDS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HPGDS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PGD synthase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HPGDS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PGD synthase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PGD synthase em células tumorais com expressão de HPGDS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.