Plásmido CRISPR de Activación (m) PGAM5: sc-428371-ACT

El gen **Pgam5** de ratón codifica **PGAM5**, una fosfatasa Ser/Thr de la membrana externa mitocondrial que integra el estado metabólico con la señalización de estrés y el control de calidad mitocondrial. PGAM5 participa en la dinámica mitocondrial al regular la maquinaria de fisión y se conecta con las vías de mitofagia, ayudando a determinar las respuestas al estrés oxidativo y a la despolarización de la membrana. Se ha relacionado con la muerte celular programada y con cascadas de señalización inflamatoria, incluida la modulación de ASK1/JNK y de redes MAPK activadas por estrés relacionadas. La desregulación de las vías asociadas a PGAM5 es relevante en modelos de neurodegeneración, lesión por isquemia-reperfusión y daño tisular mediado por el sistema inmunitario, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de las respuestas mitocondriales al estrés.

PGAM5 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Pgam5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PGAM5 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Pgam5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Pgam5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PGAM5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Pgam5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PGAM5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PGAM5 en células tumorales con expresión de Pgam5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.