PFKL CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402662

概要

PFKLは、解糖系においてフルクトース-6-リン酸をフルクトース-1,6-ビスリン酸へ変換する反応を触媒する、主要な律速酵素ホスホフルクトキナーゼ-1（PFK-1）の肝臓型アイソフォームをコードします。PFKLは、細胞内のエネルギー状態や代謝物の状況に由来するアロステリックなシグナルを統合することで、解糖系フラックスを生合成需要およびレドックスバランスと協調させる役割を担います。PFKLの活性や発現の変化は、増殖状態における代謝リプログラミングと関連づけられており、糖の利用、乳酸産生、ならびに下流での炭素フローの振り分けに影響を与えることが示されています。解糖系の中心的な結節点として、PFKLはエネルギーホメオスタシス、ストレス適応、疾患関連表現型に関わる代謝依存性を扱う研究で頻繁に解析対象となります。

PFKL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPFKL遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PFKL内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PFKLのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PFKLタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PFKLシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PFKL欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PFKLの機能に不可欠なPFKLエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PFKLゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PFKL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPFKL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PFKL遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PFKL HDRプラスミド（h）および PFKL HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPFKLホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPFKL標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。