Plásmido Doble Nickase (h) Peroxin 16: sc-411278-NIC

PEX16 codifica la peroxina 16, una proteína de la membrana peroxisomal que actúa en etapas tempranas de la biogénesis de los peroxisomas al coordinar el ensamblaje de la membrana y el reclutamiento de otras peroxinas necesarias para la formación del orgánulo. La peroxina 16 favorece el establecimiento y el mantenimiento del compartimento peroxisomal, lo que permite vías metabólicas lipídicas clave como la β-oxidación de ácidos grasos de cadena muy larga y la síntesis de fosfolípidos éter (plasmalógenos), así como la homeostasis redox dependiente de los peroxisomas. La alteración de PEX16 dificulta la formación de peroxisomas y la capacidad metabólica subsiguiente, vinculando su disfunción con trastornos de la biogénesis peroxisomal con amplias consecuencias celulares. Dado que los defectos peroxisomales influyen en la señalización lipídica, las respuestas al estrés oxidativo y la comunicación entre orgánulos, PEX16 es una diana relevante para estudios mecanísticos en modelos de enfermedades metabólicas y del neurodesarrollo.

Peroxin 16 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PEX16 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PEX16. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PEX16. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PEX16 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.