Pendrin Lentiviral Activation Particles (h2): sc-401272-LAC-2

Das humane SLC26A4-Gen kodiert Pendrin, einen membranständigen Multi-Pass-Anionenaustauscher, der den elektroneutralen Transport von Chlorid, Iodid, Bicarbonat und verwandten Substraten über epitheliale Membranen vermittelt. Pendrin trägt zur Ionen- und pH-Homöostase im Innenohr, in der Schilddrüse und im Sammelrohr der Niere bei und beeinflusst dabei die Zusammensetzung der Endolymphe, den Iodidhaushalt während der Biosynthese von Schilddrüsenhormonen sowie die Bicarbonatsekretion, gekoppelt an die Chloridrückresorption. Genetische Störungen von SLC26A4 sind stark mit dem Pendred-Syndrom sowie mit syndromischem oder nichtsyndromischem Hörverlust bei vergrößertem vestibulärem Aquädukt assoziiert, was seine Bedeutung für die Physiologie des epithelialen Transports und die Entwicklung von Sinnesorganen unterstreicht. Die Geneditierung von SLC26A4 bietet ein gut zugängliches System, um Mechanismen des Anionenaustauschs, epitheliale Polarität und intrazelluläres Trafficking sowie Genotyp-Phänotyp-Beziehungen in Organoid-, Nieren-, Schilddrüsen- oder Innenohr-Zellmodellen zu untersuchen.

Pendrin Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SLC26A4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Pendrin Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SLC26A4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Pendrin-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SLC26A4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.