Plasmide CRISPR d'Activation (h) Pendrin: sc-401272-ACT

Le gène humain SLC26A4 code la pendrine, un échangeur d’anions multipasse qui transporte le chlorure, l’iodure, le bicarbonate et le thiocyanate à travers les membranes épithéliales. La pendrine contribue à l’homéostasie ionique et au maintien du pH dans l’oreille interne, la thyroïde et le rein, reliant les programmes de transport épithélial à l’équilibre systémique des électrolytes. Dans la thyroïde, la pendrine soutient l’efflux apical d’iodure, essentiel à sa prise en charge, tandis que dans les cellules intercalaires rénales, elle module l’échange bicarbonate/chlorure impliqué dans la régulation acido-basique. Une activité dérégulée de SLC26A4 est associée à des déficits auditifs héréditaires et à des phénotypes liés à la thyroïde, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques du transport épithélial, de la biologie du développement et des relations génotype–phénotype.

Pendrin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC26A4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pendrin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC26A4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC26A4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pendrin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC26A4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pendrin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pendrin dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC26A4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.