Pellino 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402184-ACT

O gene humano PELI1 codifica a Pellino 1, uma ligase E3 de ubiquitina do tipo RING que atua como adaptador e regulador da ubiquitinação na sinalização imune inata e adaptativa. A Pellino 1 participa das vias do receptor tipo Toll (TLR) e do receptor de interleucina-1 (IL-1R) e modula a ativação downstream de NF-κB e MAPK ao moldar a montagem de complexos dependentes de ubiquitina e a duração do sinal. Por meio dessas funções, o PELI1 influencia a produção de citocinas inflamatórias, os estados de ativação de linfócitos e a homeostase imune. A atividade desregulada da Pellino 1 tem sido associada a sinalização inflamatória aberrante e a mecanismos de doenças mediadas pelo sistema imune, tornando-a relevante para o estudo de pontos de controle na transdução de sinais e do controle das vias de ubiquitina.

Pellino 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PELI1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pellino 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PELI1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PELI1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pellino 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PELI1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pellino 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pellino 1 em células tumorais com expressão de PELI1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.