Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PEBP2β Double Nickase Plasmid (h): sc-401983-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PEBP2β Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PEBP2β Double-Nickase-Plasmid (h) und PEBP2β Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CBFB abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PEBP2β: sc-56751
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PEBP2β Double Nickase Plasmid (h) | sc-401983-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PEBP2β Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401983-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CBFB kodiert die Core-binding-Factor-Untereinheit Beta (PEBP2β), einen nicht DNA-bindenden Partner, der mit RUNX-Transkriptionsfaktoren Heterodimere bildet, um deren DNA-Bindung zu stabilisieren und Transkriptionsprogramme zu regulieren, die für Hämatopoese, Osteogenese und die Differenzierung von Immunzellen erforderlich sind. Über RUNX/CBF-Komplexe beeinflusst CBFB linienspezifische Genexpression, Zellzykluskontrolle und Entwicklungsprogrammierung und ist damit an Signalwegen beteiligt, die Proliferation und Differenzierung koordinieren. Eine Störung oder Umlagerung von CBFB beeinträchtigt die Genauigkeit der Transkriptionsregulation und ist mit der Biologie hämatologischer Malignome assoziiert, was CBFB zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung von Differenzierungsblockaden und aberranter Transkriptionsregulation macht. Seine Rolle als RUNX-Kofaktor bietet zudem einen Rahmen, um nachgeschaltete Zielgene und chromatinassoziierte Mechanismen zu untersuchen, die die Festlegung der Zelllinie steuern.
PEBP2β Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CBFB-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CBFB abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CBFB-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CBFB-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.