Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) PDI: sc-400676-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PDI consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PDI (h) y el plásmido de doble nickasa PDI (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a P4HB. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PDI Anticuerpo (C-2): sc-74551
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PDI | sc-400676-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PDI | sc-400676-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano P4HB codifica la isomerasa de disulfuro de proteínas (PDI), una oxidorreductasa y chaperona multifuncional que cataliza la formación, reducción e isomerización de enlaces disulfuro durante el plegamiento de proteínas en el retículo endoplásmico. La PDI sostiene la proteostasis del RE a través de la respuesta a proteínas mal plegadas y la degradación asociada al RE, y participa en la señalización redox mediante reacciones de intercambio tiol–disulfuro. La desregulación de la actividad de P4HB/PDI se ha vinculado con respuestas alteradas al estrés celular, cambios en la capacidad de la vía secretora y desequilibrios de proteostasis observados en múltiples contextos relevantes para enfermedad, incluida la biología del cáncer y modelos de neurodegeneración. Como componente central del plegamiento oxidativo de proteínas, la PDI se estudia con frecuencia en vías que regulan la maduración proteica, la secreción y la homeostasis redox.
PDI El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus P4HB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de P4HB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de P4HB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con P4HB alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.