Partículas Lentivirales de Activación (h) PDGF Receptor alpha/PDGFRA: sc-400107-LAC

PDGFRA codifica el receptor alfa del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFRα), una tirosina cinasa receptora que se une a ligandos PDGF para regular la proliferación, la migración y la supervivencia celulares, así como programas de linaje mesenquimal. Tras su activación, PDGFRα señaliza a través de las vías canónicas MAPK/ERK, PI3K–AKT y PLCγ, y puede interactuar con la señalización de STAT y de la familia Rho para coordinar la remodelación del citoesqueleto y el patrón de desarrollo. La actividad de PDGFRA es fundamental para la comunicación estroma–epitelio, la organización de la matriz extracelular y las respuestas de reparación tisular. La expresión o la señalización desreguladas de PDGFRA se asocian con activación oncogénica del receptor, comportamiento aberrante de fibroblastos y pericitos, y procesos de remodelación relevantes para la enfermedad en múltiples microambientes tumorales y fibróticos.

Las partículas de activación lentiviral PDGF Receptor alpha/PDGFRA (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PDGFRA en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PDGF Receptor alpha/PDGFRA (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PDGFRA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PDGF Receptor alpha/PDGFRA. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PDGFRA y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.