Plásmido CRISPR de Activación (h) PDE3B: sc-401773-ACT

La fosfodiesterasa 3B (PDE3B) es una fosfodiesterasa de nucleótidos cíclicos de doble especificidad que hidroliza AMPc y GMPc para ajustar la dinámica de la señalización de segundos mensajeros de manera dependiente del tipo celular. Al restringir la señalización AMPc/PKA e integrarse con señales de insulina, adrenérgicas e inflamatorias, la PDE3B contribuye a la regulación de la lipólisis, la homeostasis de la glucosa y el balance energético, con funciones destacadas en adipocitos y en la señalización metabólica vinculada a hepatocitos. La actividad de PDE3B influye en programas transcripcionales posteriores y en redes de fosforilación que afectan el manejo de lípidos, la función mitocondrial y las vías sensibles a citocinas. La expresión o señalización desregulada de PDE3B se ha asociado con fenotipos de enfermedad metabólica y con vías de riesgo cardiometabólico, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en estudios de resistencia a la insulina y trastornos relacionados.

PDE3B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PDE3B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PDE3B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PDE3B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PDE3B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PDE3B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PDE3B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PDE3B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PDE3B en células tumorales con expresión de PDE3B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.