PD-ECGF Double Nickase Plasmid (h): sc-403836-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PD-ECGF Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PD-ECGF Double-Nickase-Plasmid (h) und PD-ECGF Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TYMP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PD-ECGF: sc-47702
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PD-ECGF Double Nickase Plasmid (h) | sc-403836-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PD-ECGF Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403836-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane TYMP-Gen kodiert die Thymidinphosphorylase, auch bekannt als platelet-derived endothelial cell growth factor (PD-ECGF). Dabei handelt es sich um ein zytosolisches Enzym, das die Phosphorolyse von Thymidin und Desoxyuridin zu Thymin bzw. Uracil und 2-Desoxyribose-1-phosphat katalysiert und dadurch den Nucleotid-„Salvage“-Stoffwechsel sowie das intrazelluläre dNTP-Gleichgewicht mitprägt. Indem PD-ECGF die Verfügbarkeit von Nukleosiden und den Stoffwechsel von Desoxyribosephosphaten beeinflusst, verknüpft es den Pyrimidinabbau mit Antworten auf DNA-Replikationsstress, der mitochondrialen Nukleotidhomöostase und redoxsensitiven zellulären Programmen. Eine veränderte TYMP-Aktivität ist an der Pathobiologie der mitochondrialen neurogastrointestinalen Enzephalomyopathie (MNGIE) beteiligt und wurde in Zusammenhängen untersucht, in denen der Nukleosidstoffwechsel mit angiogener Signalgebung und der Anpassung des Tumormikromilieus zusammenwirkt. Diese Eigenschaften machen TYMP zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zu Nukleosidflüssen, Genomstabilität und stoffwechselassoziierten Phänotypen in menschlichen Zellen.
PD-ECGF Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TYMP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TYMP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TYMP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TYMP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.