Plasmide CRISPR d'Activation (h) PCDH20: sc-406005-ACT

PCDH20 code la protocadhérine‑20, une protéine d’adhésion cellule‑cellule dépendante du calcium qui contribue à l’architecture tissulaire et à la signalisation dans des contextes épithéliaux et neuronaux. En tant que membre de la superfamille des protocadhérines/cadhérines, PCDH20 influence la communication médiée par le contact, l’organisation du cytosquelette et des processus liés à la polarité et à la motilité cellulaires. Une expression altérée de PCDH20 a été rapportée dans de nombreux cancers, où des modifications des programmes d’adhésion et de la signalisation associée peuvent influer sur l’invasion et le potentiel métastatique. Comme les molécules d’adhésion s’articulent avec des voies telles que Wnt/β‑caténine et d’autres réseaux de signalisation jonctionnelle, PCDH20 est fréquemment étudiée pour son rôle dans la différenciation, la biologie tumorale et les interactions avec le microenvironnement.

PCDH20 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PCDH20 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PCDH20 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PCDH20 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PCDH20, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PCDH20. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PCDH20 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PCDH20 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PCDH20 dans les cellules tumorales présentant une expression de PCDH20 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.