PBGD Plasmide Double Nickase (h): sc-404924-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PBGD Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PBGD Double Nickase Plasmid (h) e il PBGD Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HMBS. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PBGD Antibody (E-9): sc-166743
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PBGD Plasmide Double Nickase (h) | sc-404924-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PBGD Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404924-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HMBS umano codifica la porfobilinogeno deaminasi (PBGD), un enzima citosolico che catalizza la polimerizzazione del porfobilinogeno in idrossimetilbilano durante la biosintesi dell’eme. Questo passaggio sostiene la produzione di eme necessaria per la respirazione mitocondriale, la funzione dei citocromi e la gestione dell’ossigeno nei tessuti eritroidi e non eritroidi. L’attività di HMBS si integra con il metabolismo delle porfirine e l’omeostasi redox cellulare, collegando la disponibilità di eme alle risposte allo stress ossidativo e all’adattamento metabolico. Alterazioni genetiche o funzionali di HMBS sono associate a difetti del flusso nella via delle porfirine e sono rilevanti per studi sulle porfirie epatiche acute e sulla regolazione eritroide dell’eme.
PBGD Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HMBS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HMBS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HMBS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HMBS interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.