Plásmido CRISPR de Activación (m) Pax-9: sc-422122-ACT

El gen Pax9 de ratón codifica el factor de transcripción de caja pareada Pax-9, un regulador nuclear de unión al ADN necesario para el establecimiento de patrones y la organogénesis, con funciones destacadas en la morfogénesis craneofacial, la odontogénesis y los tejidos derivados de las bolsas faríngeas. Pax-9 influye en las redes reguladoras génicas del desarrollo al coordinar programas transcripcionales que se entrecruzan con la señalización epitelio-mesenquimal y con vías implicadas en la especificación y diferenciación tisular, incluidos procesos asociados a Wnt y BMP. La expresión o función desregulada de Pax9 se ha vinculado a anomalías congénitas del desarrollo, en especial a la agenesia dental y a defectos craneofaciales, lo que lo convierte en un locus útil para estudiar la dosis génica, la lógica de los potenciadores (enhancers) y el compromiso de linaje en sistemas de mamíferos.

Pax-9 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Pax9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Pax-9 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Pax9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Pax9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Pax-9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Pax9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Pax-9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Pax-9 en células tumorales con expresión de Pax9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.