Pax-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422119

概要

マウスPax6は、ペアードボックス転写因子Pax-6をコードしている。Pax-6は眼および中枢神経系の発生におけるマスター制御因子であり、系譜（ラインエージ）決定、神経新生、組織パターニングを制御する。Pax-6はエンハンサー要素に結合して、前駆細胞の増殖と分化を司る遺伝子発現プログラムを協調的に制御し、Wnt、SHH、FGF経路などを含む発生シグナル伝達ネットワークと統合的に働く。成熟組織では、Pax-6は神経細胞としてのアイデンティティの維持や膵内分泌系遺伝子の制御に寄与し、グルコース恒常性を支える。Pax6の活性や発現量（ドサージュ）の異常は先天性眼形成異常や神経発達表現型と強く関連しており、発生における遺伝子制御回路の機構研究における重要な標的となっている。

Pax-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPax6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pax6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pax6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Pax-6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Pax-6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pax6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Pax-6の機能に不可欠なPax6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pax6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Pax-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPax-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pax6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Pax-6 HDRプラスミド（m）および Pax-6 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPax6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPax6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。