Plásmido Doble Nickase (h) patched/PTCH1: sc-400457-NIC

PTCH1 codifica el receptor humano Patched, una proteína transmembrana de 12 pasos que actúa como el principal componente de unión a ligando e inhibidor de la vía de señalización Hedgehog. En ausencia de ligandos Hedgehog, PTCH1 suprime la actividad de SMO para restringir programas de transcripción dependientes de GLI que controlan el patrón embrionario, el comportamiento de células madre/progenitoras y la homeostasis tisular. La actividad de PTCH1 está estrechamente vinculada al tráfico ciliar y a la transducción de señales en el cilio primario, integrando señales del desarrollo con estados del ciclo celular y de diferenciación. Las alteraciones genéticas y regulatorias de PTCH1 se asocian con una salida desregulada de la vía Hedgehog y se estudian ampliamente en trastornos del desarrollo y en la biología tumoral impulsada por Hedgehog.

patched/PTCH1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PTCH1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PTCH1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PTCH1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PTCH1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.