Paraplegin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406299

Descripción general

SPG7 codifica paraplegina, una metaloproteasa dependiente de ATP de la membrana interna mitocondrial, integrante del complejo proteasa m-AAA, que sustenta el control de calidad proteica, el procesamiento proteolítico y el recambio de sustratos mal plegados asociados a la membrana y a la matriz. La paraplegina contribuye a la proteostasis mitocondrial, al mantenimiento de la cadena respiratoria y a respuestas homeostáticas frente al estrés oxidativo y proteotóxico mediante una vigilancia coordinada de la composición proteica de la membrana interna. La alteración de SPG7 perturba la función mitocondrial y se asocia a fenotipos neurodegenerativos, incluida la paraplejia espástica hereditaria, lo que lo convierte en una diana útil para estudiar la vulnerabilidad axonal y el mantenimiento neuronal dependiente de la energía. Los modelos centrados en SPG7 también aportan información sobre vías implicadas en la dinámica mitocondrial, las respuestas a proteínas mal plegadas y la señalización adaptativa al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Paraplegin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SPG7 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SPG7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SPG7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Paraplegin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SPG7 para la investigación de la señalización de Paraplegin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SPG7 críticos para la función de Paraplegin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SPG7 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Paraplegin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Paraplegin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SPG7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Paraplegin (h) y el plásmido HDR Paraplegin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SPG7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SPG7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.