Plasmide CRISPR/Cas9 KO PAPP-A (h): sc-406222

Présentation

PAPPA code la protéine plasmatique A associée à la grossesse (PAPP-A), une métalloprotéinase sécrétée de la famille des pappalysines qui régule la biodisponibilité du facteur de croissance de type insuline (IGF) en clivant les protéines de liaison à l’IGF, en particulier IGFBP4 et IGFBP5. En augmentant localement la fraction libre d’IGF, PAPP-A module les voies de signalisation dépendantes d’IGF1R telles que PI3K–AKT et MAPK/ERK, influençant la prolifération, la différenciation et la survie cellulaires dans des contextes de remodelage tissulaire. L’activité de PAPP-A est également liée à une protéolyse au voisinage de la matrice extracellulaire et à une régulation paracrine de la signalisation des facteurs de croissance dans des microenvironnements vasculaires et stromaux. Une expression ou une activité dérégulée de PAPPA a été associée à la biologie placentaire, à la biologie des plaques athéroscléreuses et à des phénotypes cardiométaboliques inflammatoires, ce qui motive des études mécanistiques du contrôle de l’axe IGF dans des types cellulaires pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PAPP-A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PAPPA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PAPPA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PAPPA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PAPP-A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PAPPA pour l'étude de la signalisation de PAPP-A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PAPPA essentiels à la fonction de PAPP-A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PAPPA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PAPP-A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PAPP-A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PAPPA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PAPP-A plasmide HDR (h) et le PAPP-A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PAPPA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PAPPA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.