Plasmide CRISPR/Cas9 KO Papilin (h): sc-406332

Présentation

PAPLN code la papiline, une grande glycoprotéine associée à la matrice extracellulaire, caractérisée par de multiples domaines d’interaction modulaires qui soutiennent l’organisation de la matrice et l’architecture de la membrane basale. La papiline est impliquée dans la régulation des protéases extracellulaires et le remodelage de la matrice, des processus qui influencent l’adhérence cellulaire, la migration et la morphogenèse tissulaire. Par ces fonctions orientées vers la matrice, PAPLN est pertinente pour des voies qui couplent la dynamique de la matrice extracellulaire à des programmes de remodelage développementaux et pathologiques, notamment dans des contextes où une protéolyse altérée et une organisation stromale modifiée contribuent à la biologie des maladies. L’étude de PAPLN soutient les travaux mécanistiques sur l’homéostasie de la matrice extracellulaire et les interfaces de signalisation cellule–matrice.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Papilin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PAPLN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PAPLN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PAPLN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Papilin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PAPLN pour l'étude de la signalisation de Papilin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PAPLN essentiels à la fonction de Papilin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PAPLN pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Papilin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Papilin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PAPLN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Papilin plasmide HDR (h) et le Papilin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PAPLN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PAPLN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.