Plásmido CRISPR de Activación (h) PAPD5: sc-412997-ACT

El gen humano **PAPD5** codifica una poli(A) polimerasa no canónica (también conocida como **TENT4B**) que reside principalmente en el núcleo y participa en la regulación génica postranscripcional mediante el añadido de colas a los ARN. PAPD5 coopera con las maquinarias de vigilancia y degradación de ARN para influir en la estabilidad del ARN y en el control de calidad, contribuyendo a la homeostasis del transcriptoma e impactando procesos como las respuestas al estrés y la diferenciación. Al modular el destino del ARN, PAPD5 se integra con vías más amplias que gobiernan la robustez de la expresión génica, incluida la biogénesis de ribonucleoproteínas y el recambio de ARN nuclear. La actividad desregulada de PAPD5 se ha vinculado en la literatura a fenotipos de metabolismo del ARN alterado relevantes para la biología del cáncer y para trastornos hereditarios que implican un procesamiento aberrante del ARN.

PAPD5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PAPD5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PAPD5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PAPD5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PAPD5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PAPD5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PAPD5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PAPD5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PAPD5 en células tumorales con expresión de PAPD5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.