PAOX Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406710

Panoramica

Il gene umano PAOX codifica per la poliammine ossidasi, un enzima flavino-dipendente che catalizza la retro-conversione delle poliammine acetilate, contribuendo all’omeostasi cellulare delle poliammine e alla regolazione dei pool intracellulari di spermidina e spermina. L’attività di PAOX collega il catabolismo delle poliammine alla biologia redox tramite la produzione di perossido di idrogeno e aldeidi reattive, influenzando le risposte allo stress ossidativo, la funzione mitocondriale e più ampi processi di adattamento metabolico. Attraverso questi meccanismi, PAOX viene studiato in vie che regolano proliferazione e differenziamento cellulari, nonché la segnalazione indotta dallo stress. Alterazioni del metabolismo delle poliammine e sottoprodotti ossidativi associati a PAOX sono frequentemente indagati nel contesto della biologia del cancro, della neurodegenerazione e dei processi infiammatori, come correlati molecolari di crescita deregolata e danno cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PAOX (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PAOX in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PAOX insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PAOX a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PAOX.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PAOX per lo studio della segnalazione di PAOX, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PAOX critici per la funzione di PAOX
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PAOX per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PAOX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PAOX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PAOX. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PAOX Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PAOX (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PAOX per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PAOX definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.