Plasmide CRISPR/Cas9 KO PAOX (h): sc-406710

Présentation

Le gène humain PAOX code une polyamine oxydase, une enzyme flavino-dépendante qui catalyse la rétroconversion des polyamines acétylées, contribuant à l’homéostasie cellulaire des polyamines et à la régulation des pools intracellulaires de spermidine et de spermine. L’activité de PAOX relie le catabolisme des polyamines à la biologie redox via la production de peroxyde d’hydrogène et d’aldéhydes réactifs, influençant les réponses au stress oxydant, la fonction mitochondriale et, plus largement, l’adaptation métabolique. Par ces mécanismes, PAOX est étudié dans des voies qui régissent la prolifération cellulaire, la différenciation et la signalisation induite par le stress. Les altérations du métabolisme des polyamines et les sous-produits oxydatifs associés à PAOX sont fréquemment étudiés dans le contexte de la biologie du cancer, de la neurodégénérescence et des processus inflammatoires, en tant que corrélats moléculaires d’une croissance dérégulée et de dommages cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PAOX (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PAOX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PAOX, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PAOX à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PAOX.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PAOX pour l'étude de la signalisation de PAOX, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PAOX essentiels à la fonction de PAOX
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PAOX pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PAOX plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PAOX plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PAOX. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PAOX plasmide HDR (h) et le PAOX (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PAOX pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PAOX définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.