PAO Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404683

Descripción general

El gen humano **SMOX** codifica la **poliamina oxidasa (PAO)**, una enzima peroxisomal dependiente de flavina que cataliza la retroconversión oxidativa de la espermina a espermidina, vinculando el flujo de poliaminas con el equilibrio redox celular. Esta reacción genera peróxido de hidrógeno y subproductos aldehídicos, conectando la actividad de SMOX con la señalización por estrés oxidativo, las respuestas al daño del ADN y la regulación de la proliferación y la diferenciación. SMOX/PAO interactúa con redes de biosíntesis y catabolismo de poliaminas que influyen en la dinámica de la cromatina y la traducción, y su desregulación se ha asociado en la literatura con inflamación, neurodegeneración y remodelación metabólica relacionada con el cáncer. Como nodo de la homeostasis de poliaminas, SMOX se estudia con frecuencia por su impacto en la función mitocondrial, la susceptibilidad a la ferroptosis y los programas transcripcionales de adaptación al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PAO (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SMOX en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SMOX junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SMOX tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PAO.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SMOX para la investigación de la señalización de PAO, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SMOX críticos para la función de PAO
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SMOX para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PAO CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PAO CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SMOX. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PAO (h) y el plásmido HDR PAO (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SMOX para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SMOX definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.