Plasmide CRISPR/Cas9 KO PAO (h): sc-404683

Présentation

Le gène humain **SMOX** code la **polyamine oxydase (PAO)**, une enzyme peroxysomale flavino‑dépendante qui catalyse la rétroconversion oxydative de la spermine en spermidine, reliant ainsi le flux des polyamines à l’équilibre rédox cellulaire. Cette réaction génère du peroxyde d’hydrogène et des sous‑produits aldéhydiques, ce qui associe l’activité de SMOX à la signalisation du stress oxydant, aux réponses aux dommages de l’ADN et à la régulation de la prolifération et de la différenciation. SMOX/PAO s’inscrit à l’interface des réseaux de biosynthèse et de catabolisme des polyamines, qui influencent la dynamique de la chromatine et la traduction, et sa dérégulation a été associée dans la littérature à l’inflammation, à la neurodégénérescence et au remodelage métabolique lié au cancer. En tant que nœud de l’homéostasie des polyamines, SMOX est fréquemment étudié pour son impact sur la fonction mitochondriale, la sensibilité à la ferroptose et les programmes transcriptionnels d’adaptation au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PAO (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SMOX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SMOX, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SMOX à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PAO.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SMOX pour l'étude de la signalisation de PAO, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SMOX essentiels à la fonction de PAO
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SMOX pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PAO plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PAO plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SMOX. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PAO plasmide HDR (h) et le PAO (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SMOX pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SMOX définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.