PAM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422110

Descripción general

La monooxigenasa α-amidante de peptidilglicina (PAM), codificada por el gen Pam del ratón, es una enzima bifuncional que cataliza la amidación en el extremo C de numerosos neuropéptidos y hormonas peptídicas, una modificación necesaria para su plena bioactividad. Esta vía, dependiente de cobre y ascorbato, sostiene la maduración de péptidos dentro de la vía secretora e influye en la secreción regulada en células neuroendocrinas y neuronales. La actividad de Pam vincula la biogénesis de vesículas y la función de los gránulos secretores con redes de señalización de neuropéptidos que modulan la transmisión sináptica, las respuestas al estrés, el metabolismo y la homeostasis cardiovascular. La amidación peptídica desregulada y la función alterada de PAM se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, desequilibrio endocrino y rasgos cardiometabólicos, lo que convierte a Pam en un locus útil para estudios mecanísticos de la biología de la vía secretora.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PAM (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pam en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pam junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pam tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PAM.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pam para la investigación de la señalización de PAM, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pam críticos para la función de PAM
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pam para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PAM CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PAM CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pam. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PAM (m) y el plásmido HDR PAM (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pam para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pam definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.