PADI2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422175-ACT

マウスのPadi2は、ペプチジルアルギニンデイミナーゼ2（PADI2）をコードしており、カルシウム依存性の酵素としてタンパク質のシトルリン化を触媒します。これはアルギニン残基をシトルリンに変換し、タンパク質の電荷、構造、相互作用ネットワークを変化させます。PADI2の活性は、ヒストンやその他の核内基質のシトルリン化を介してクロマチンおよび転写プログラムを調節し、さらに分化や炎症性シグナル伝達の文脈において、細胞骨格タンパク質や細胞外タンパク質の機能にも影響を及ぼします。シトルリン化の制御異常は自己抗原の生成や異常な免疫活性化と関連づけられており、PADI2は自然免疫、エピジェネティックな制御、細胞ストレス応答を結び付ける経路でしばしば研究対象となります。マウスモデルでは、Padi2の改変を用いて免疫細胞の極性化、上皮のリモデリング、翻訳後修飾と遺伝子制御状態を結び付ける機構の解明が行われています。

PADI2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Padi2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PADI2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Padi2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPadi2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PADI2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPadi2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPADI2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPadi2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPADI2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。