Plásmido Doble Nickase (h) PAcP: sc-405118-NIC

ACPP codifica la fosfatasa ácida prostática (PAcP), una fosfatasa ácida secretada e intracelular que hidroliza monoésteres de fosfato y puede funcionar como una fosfatasa de tirosina de proteínas en células epiteliales prostáticas. La actividad de PAcP influye en la señalización dependiente de la fosforilación y en programas de diferenciación celular, con conexiones descritas con vías de receptores de factores de crecimiento y vías sensibles a andrógenos que moldean la homeostasis de las células prostáticas. La expresión alterada de ACPP y la función enzimática de PAcP se han estudiado en el contexto de la biología del cáncer de próstata, incluidos cambios en la salida de señalización y en el fenotipo de las células tumorales. Como marcador enriquecido en próstata con vínculos mecanísticos con la fosforregulación, ACPP se utiliza con frecuencia para investigar la identidad de linaje, el control de la señalización y la remodelación de vías asociadas al cáncer.

PAcP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ACPP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ACPP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ACPP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ACPP alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.