Partículas Lentivirales de Activación (h) PA200: sc-404513-LAC

El PSME4 humano codifica PA200, un activador del proteasoma que se une a la partícula central 20S y promueve la proteólisis independiente de ubiquitina en el núcleo. PA200 contribuye al recambio de proteínas asociadas a la cromatina durante las respuestas al daño del ADN y se vincula a procesos como el control de la transcripción, la progresión del ciclo celular y el mantenimiento de la estabilidad del genoma. Mediante la regulación de la actividad del proteasoma en sitios de reparación del ADN y durante programas de remodelación de la cromatina relacionados con la espermatogénesis, PA200 ayuda a modular la proteostasis bajo estrés genotóxico. La actividad desregulada de PSME4/PA200 se ha asociado con alteraciones en la función del proteasoma y en redes de señalización implicadas en la biología del cáncer y otros trastornos en los que la homeostasis de proteínas nucleares está perturbada.

Las partículas de activación lentiviral PA200 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PSME4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PA200 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PSME4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PA200. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PSME4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.