P5CRL CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406033

概要

PYCRL は、プロリンおよび関連アミノ酸の酸化還元代謝に関与するとされる NAD(P)H 依存性還元酵素ファミリーの一員である、ピロリジン-5-カルボン酸還元酵素様タンパク質（P5CRL）をコードします。プロリンの生合成と代謝回転は、細胞内のレドックスバランス、NADP(H) 恒常性、ならびにミトコンドリア関連の代謝適応に影響し、PYCRL を酸化ストレス応答や生合成フラックス制御といったより広範なプロセスと結び付けます。プロリン経路酵素の機能撹乱は、細胞増殖、コラーゲン関連需要を介した細胞外マトリックスのリモデリング、そして栄養ストレス耐性に影響し得ます。そのため PYCRL は、がん生物学や遺伝性代謝異常を含む、レドックスおよびアミノ酸代謝が変化する疾患関連状況における代謝リプログラミングを研究する上で関心の高い標的です。

P5CRL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPYCRL遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PYCRL内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PYCRLのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、P5CRLタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、P5CRLシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PYCRL欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• P5CRLの機能に不可欠なPYCRLエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PYCRLゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• P5CRL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびP5CRL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PYCRL遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  P5CRL HDRプラスミド（h）および P5CRL HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPYCRLホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPYCRL標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。