P5CRL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406033

Visão geral

PYCRL codifica uma proteína semelhante à redutase de pirrolina-5-carboxilato (P5CRL), membro da família de redutases dependentes de NAD(P)H implicada no metabolismo redox da prolina e de aminoácidos relacionados. A biossíntese e o turnover da prolina influenciam o equilíbrio redox celular, a homeostase de NADP(H) e a adaptação metabólica associada às mitocôndrias, ligando o PYCRL a processos mais amplos, como respostas ao estresse oxidativo e controle do fluxo biossintético. Alterações em enzimas da via da prolina podem afetar a proliferação, a remodelação da matriz extracelular por demandas associadas ao colágeno e a tolerância ao estresse nutricional. Assim, o PYCRL é de interesse para estudar a reprogramação metabólica em contextos relevantes para doenças em que o metabolismo redox e de aminoácidos está alterado, incluindo biologia do câncer e disfunções metabólicas hereditárias.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO P5CRL (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PYCRL em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PYCRL, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PYCRL na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína P5CRL.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PYCRL para a investigação da sinalização de P5CRL, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PYCRL críticos para a função P5CRL
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PYCRL para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo P5CRL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo P5CRL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PYCRL. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo P5CRL Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR P5CRL (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PYCRL para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PYCRL definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.