Plásmido Doble Nickase (m) P2Y12: sc-427818-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)P2Y12 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa P2Y12 (m) y el plásmido de doble nickasa P2Y12 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a P2ry12. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) P2Y12 | sc-427818-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) P2Y12 | sc-427818-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen murino P2ry12 codifica el receptor purinérgico P2Y12, un GPCR acoplado a Gi que detecta el ADP extracelular para suprimir la señalización de AMPc y coordinar respuestas posteriores de PI3K–Akt y MAPK. En el sistema nervioso central, P2Y12 está altamente enriquecido en la microglía, donde regula la motilidad de sus prolongaciones, la quimiotaxis y los comportamientos de vigilancia en respuesta a señales purinérgicas liberadas por células estresadas o dañadas. La señalización dependiente de P2Y12 influye en la comunicación neuroinmunitaria, la remodelación sináptica y el tono inflamatorio, lo que convierte a P2ry12 en un marcador molecular de uso extendido y en un nodo funcional clave en la biología microglial. La desregulación de la señalización purinérgica a través de P2Y12 se ha asociado con estados alterados de activación microglial en modelos de neuroinflamación y neurodegeneración.
P2Y12 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus P2ry12 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de P2ry12. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de P2ry12. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con P2ry12 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.