Particules Lentivirales d'Activation (h) P2X6: sc-416264-LAC

P2RX6 code pour le récepteur P2X6, un canal cationique de la famille purinergique P2X activé par l’ATP, qui contribue à une entrée rapide de Na⁺ et de Ca²⁺ et à la dépolarisation membranaire en aval dans les cellules excitables comme non excitables. P2X6 peut s’assembler en tant que sous-unité fonctionnelle au sein de complexes hétéromériques de récepteurs P2X, modulant le trafic du récepteur, sa cinétique et sa sensibilité à l’ATP. En régulant la signalisation calcique intracellulaire, P2X6 influence des voies liées à la neurotransmission, à la communication neuro-immune et aux réponses inflammatoires déclenchées par des stimuli. Une signalisation purinergique dérégulée impliquant des membres de la famille P2X a été associée à des mécanismes de maladies neurologiques et inflammatoires, faisant de P2RX6 une cible utile pour disséquer les réseaux de signalisation induits par l’ATP.

Les particules d'activation lentivirales P2X6 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de P2RX6 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales P2X6 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription P2RX6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de P2X6. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif P2RX6 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.