P2X6 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-416264-LAC

P2RX6 codifica il recettore P2X6, un canale cationico attivato dall’ATP della famiglia purinergica P2X, che contribuisce al rapido ingresso di Na⁺ e Ca²⁺ e alla conseguente depolarizzazione della membrana in cellule eccitabili e non eccitabili. P2X6 può assemblarsi come subunità funzionale all’interno di complessi recettoriali P2X eteromerici, modulando il traffico del recettore, la cinetica e la sensibilità all’ATP. Attraverso la regolazione della segnalazione del calcio intracellulare, P2X6 influenza vie legate alla neurotrasmissione, alla comunicazione neuro-immunitaria e alle risposte infiammatorie evocate da stimoli. Una segnalazione purinergica deregolata che coinvolge membri della famiglia P2X è stata associata a meccanismi di malattie neurologiche e infiammatorie, rendendo P2RX6 un bersaglio utile per analizzare le reti di segnalazione guidate dall’ATP.

Le particelle di attivazione lentivirale P2X6 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di P2RX6 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale P2X6 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione P2RX6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di P2X6. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo P2RX6 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.