P/Q-type Ca++ CP α1A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419400
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- P/Q-type Ca++ CP α1A El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico P/Q-type Ca++ CP α1A, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: P/Q-type Ca++ CP α1A Anticuerpo (C-2): sc-390004
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
P/Q-type Ca++ CP α1A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419400 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Cacna1a codifica la subunidad α1A formadora del poro del canal de calcio dependiente de voltaje tipo P/Q (CaV2.1), una vía principal de entrada de Ca2+ dependiente de la actividad en neuronas. CaV2.1 acopla la despolarización de la membrana con la exocitosis de vesículas sinápticas, modulando la probabilidad de liberación de neurotransmisores, la plasticidad a corto plazo y la excitabilidad de los circuitos mediante vías de señalización dependientes de Ca2+. La función del canal se integra con proteínas presinápticas de la zona activa y con sensores de Ca2+ aguas abajo que regulan el anclaje y la fusión de vesículas. La alteración genética y funcional de CACNA1A/CaV2.1 se ha vinculado a fenotipos neurológicos que implican transmisión sináptica alterada e inestabilidad de redes, lo que lo convierte en un objetivo clave para estudios mecanísticos de neurofisiología.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO P/Q-type Ca++ CP α1A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cacna1a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cacna1a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cacna1a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína P/Q-type Ca++ CP α1A.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cacna1a para la investigación de la señalización de P/Q-type Ca++ CP α1A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Cacna1a críticos para la función de P/Q-type Ca++ CP α1A
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cacna1a para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido P/Q-type Ca++ CP α1A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido P/Q-type Ca++ CP α1A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cacna1a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR P/Q-type Ca++ CP α1A (m) y el plásmido HDR P/Q-type Ca++ CP α1A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cacna1a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cacna1a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.