Plásmido Doble Nickase (m) OTUB1: sc-430702-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)OTUB1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa OTUB1 (m) y el plásmido de doble nickasa OTUB1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Otub1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: OTUB1 Anticuerpo (J-61): sc-130458
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) OTUB1 | sc-430702-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) OTUB1 | sc-430702-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Otub1 de ratón codifica OTUB1, una desubiquitinasa de la familia de tumores ováricos (OTU) que edita la arquitectura de las cadenas de ubiquitina y suprime la señalización dependiente de ubiquitina. OTUB1 regula la proteostasis y las respuestas al estrés al modular la ubiquitinación enlazada por K48 y K63, con funciones bien descritas en la respuesta al daño del ADN mediante la regulación de la señalización de ubiquitina en roturas de doble cadena. Al moldear el flujo de las vías mediadas por ubiquitina, OTUB1 influye en la progresión del ciclo celular, la estabilidad genómica y los resultados de la señalización inflamatoria. La actividad desregulada de OTUB1 se ha asociado con señalización aberrante en vías relevantes para el cáncer y con procesos inmunitarios y neurobiológicos alterados, lo que respalda su estudio en contextos de modelado de enfermedades.
OTUB1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Otub1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Otub1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Otub1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Otub1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.