OTUB1 Double Nickase Plasmid (h): sc-407665-NIC

OTUB1 (OTU-Deubiquitinase, Ubiquitin-Aldehyd-Bindung 1) ist eine Cysteinprotease-Deubiquitinase, die bevorzugt K48-verknüpfte Ubiquitinketten spaltet und zudem E2-Ubiquitin-konjugierende Enzyme hemmen kann, wodurch sie die Outputs der Ubiquitin-Signalgebung mitprägt. Über diese Aktivitäten reguliert OTUB1 die Proteinstabilität und die Signaldynamik in Signalwegen, die DNA-Schadensantworten, Zellzyklusprogression und Stresssignalgebung steuern, einschließlich der Modulation von Komponenten des p53-Signalwegs und reparaturassoziierter Ubiquitinierungsereignisse. Die durch OTUB1 vermittelte Feinabstimmung der ubiquitinabhängigen Proteostase beeinflusst Knotenpunkte der Immun- und Entzündungssignalgebung und kann den Abbau zentraler regulatorischer Proteine verändern. Eine fehlregulierte OTUB1-Expression oder -Aktivität wurde in mehreren Krebs-Kontexten und anderen Erkrankungen beschrieben, in denen Ubiquitin-Homöostase und Genomwartung gestört sind, was seine Eignung als mechanistisches Ziel in pfadfokussierter Forschung unterstützt.

OTUB1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des OTUB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von OTUB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die OTUB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit OTUB1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.