Olfr291 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-434560-LAC

Olfr291 codifica un recettore olfattivo murino (Olfr291) appartenente alla superfamiglia dei GPCR di classe A di tipo rodopsinico, noto soprattutto per il rilevamento di ligandi odoranti nell’epitelio olfattivo. In seguito al legame con il ligando, i recettori olfattivi si accoppiano alla segnalazione mediata da proteine G per stimolare l’adenilato ciclasi, aumentare i livelli di cAMP e aprire i canali ionici regolati da nucleotidi ciclici, modellando infine l’eccitabilità dei neuroni sensoriali e i programmi trascrizionali evocati dagli odori. Oltre alla funzione sensoriale, è stata riportata un’espressione ectopica dei geni dei recettori olfattivi in vari tessuti in modo dipendente dal contesto, stimolando studi sulla segnalazione guidata dai GPCR, sull’identità cellulare e sui segnali del microambiente. La disregolazione delle reti di GPCR olfattivi è rilevante per i meccanismi della disfunzione olfattiva e fornisce un modello maneggevole per indagare la trasduzione del segnale dei GPCR e la regolazione genica nei sistemi murini.

Le particelle di attivazione lentivirale Olfr291 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Olfr291 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Olfr291 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Olfr291, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Olfr291. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Olfr291 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.