OIP106 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406170

Übersicht

TRAK1 kodiert OIP106, einen zytoplasmatischen Adapter, der an der Organisation des intrazellulären Transports beteiligt ist, indem er Fracht an mikrotubulusbasierte Motorprotein-Komplexe koppelt. OIP106 wird mit dem Transport und der Positionierung von Mitochondrien in Verbindung gebracht – Prozesse, die neuronale Polarität, axonalen Transport und die zelluläre Bioenergetik beeinflussen. Aufgrund dieser Funktionen wird TRAK1 in Signal- und Regulationswegen untersucht, die Organelldynamik, Zytoskelettorganisation und Stressantworten steuern und damit Zellüberleben und Differenzierung prägen. Eine Fehlregulation des Organellentransports und der mitochondrialen Verteilung ist für die Forschung zu Mechanismen neuroentwicklungsbedingter und neurodegenerativer Erkrankungen sowie weiterer Störungen mit veränderter zellulärer Energetik relevant.

Das OIP106 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TRAK1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TRAK1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TRAK1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die OIP106-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TRAK1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der OIP106-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TRAK1-Exone abzielen, die für die OIP106-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TRAK1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom OIP106 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom OIP106 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TRAK1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das OIP106 HDR-Plasmid (h) und OIP106 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TRAK1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TRAK1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.