ODC Double Nickase Plasmid (h): sc-401055-NIC

Humanes ODC1 kodiert die Ornithin-Decarboxylase (ODC), das geschwindigkeitsbestimmende Enzym der Polyaminbiosynthese, das die Decarboxylierung von Ornithin katalysiert und dabei Putrescin erzeugt, welches die Bildung von Spermidin und Spermine antreibt. Über die Kontrolle intrazellulärer Polyamin-Pools beeinflusst ODC die DNA-Replikation, die Chromatin-Dynamik, die Translation und den Zellzyklusverlauf und ist in wachstumsfaktorresponsive Signalwege sowie Programme bei metabolischem Stress eingebunden. Die ODC-Aktivität wird streng reguliert – auf Ebene der Transkription, durch antizymvermittelte Degradation und durch Rückkopplung via Polyamin-Metabolite –, wodurch ODC1 einen zentralen Knotenpunkt der zellulären Homöostase darstellt. Eine dysregulierte Polyamin-Metabolisierung und veränderte ODC1-Expression wurden mit proliferativen und inflammatorischen Zuständen in Verbindung gebracht und werden häufig in der Krebsbiologie sowie in Studien zum metabolischen Remodeling untersucht.

ODC Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ODC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ODC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ODC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ODC1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.