Oct3/4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410951-ACT

O gene humano **POU5F1B** codifica a Oct3/4, uma proteína relacionada a fatores de transcrição do tipo domínio POU, implicada na regulação de programas transcricionais associados à pluripotência e do estado da cromatina. Redes ligadas a Oct3/4 se interseccionam com a circuitaria de “stemness”, o remodelamento epigenético e processos de determinação do destino celular que influenciam o potencial de diferenciação e os fenótipos de autorrenovação. Expressão desregulada ou alterações no número de cópias envolvendo **POU5F1B** foram relatadas em múltiplos contextos tumorais, nos quais a atividade alterada de fatores OCT pode se associar à proliferação, à plasticidade de linhagem e ao reprogramamento transcricional. Como resultado, **POU5F1B** é frequentemente estudado em modelos de transcrição oncogênica, reprogramação celular e regulação gênica do desenvolvimento.

Oct3/4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de POU5F1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Oct3/4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus POU5F1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição POU5F1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Oct3/4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus POU5F1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Oct3/4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Oct3/4 em células tumorais com expressão de POU5F1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.