Plásmido CRISPR de Activación (h) Oct3/4: sc-410951-ACT

El POU5F1B humano codifica Oct3/4, una proteína relacionada con factores de transcripción con dominio POU, implicada en la regulación de programas transcripcionales asociados a la pluripotencia y del estado de la cromatina. Las redes vinculadas a Oct3/4 se interconectan con los circuitos de “stemness”, la remodelación epigenética y los procesos de determinación del destino celular que influyen en el potencial de diferenciación y en los fenotipos de autorrenovación. Se han descrito expresión desregulada o cambios en el número de copias que involucran a POU5F1B en múltiples contextos tumorales, donde la actividad alterada de factores OCT puede asociarse con proliferación, plasticidad de linaje y reprogramación transcripcional. En consecuencia, POU5F1B se estudia con frecuencia en modelos de transcripción oncogénica, reprogramación celular y regulación génica del desarrollo.

Oct3/4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de POU5F1B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Oct3/4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus POU5F1B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional POU5F1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Oct3/4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo POU5F1B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Oct3/4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Oct3/4 en células tumorales con expresión de POU5F1B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.