Partículas Lentivirales de Activación (h) Nup37: sc-409458-LAC

NUP37 codifica Nup37, un componente central del subcomplejo Nup107–160 del complejo del poro nuclear, que sostiene el ensamblaje de la envoltura nuclear y el transporte nucleocitoplasmático de proteínas y ARN. Al contribuir a la arquitectura del CPN, Nup37 ayuda a coordinar la progresión del ciclo celular, los eventos mitóticos y la regulación del genoma mediante el tráfico controlado de factores de transcripción y mediadores de señalización. La alteración de la composición de los poros nucleares se vincula con frecuencia a cambios en la organización de la cromatina y en la señalización de respuesta al estrés, lo que convierte a NUP37 en un punto de entrada útil para estudiar la regulación de la proliferación y la diferenciación dependiente del transporte. Se ha descrito expresión desregulada o dependencia de la función de nucleoporinas en múltiples contextos tumorales, lo que respalda la investigación sobre vulnerabilidades del transporte nuclear y la reprogramación de vías sin implicar un uso terapéutico.

Las partículas de activación lentiviral Nup37 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de NUP37 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Nup37 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción NUP37, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Nup37. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo NUP37 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.