Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nup205: sc-404728-ACT

Le gène humain **NUP205** code **Nup205**, un composant d’échafaudage essentiel du complexe du pore nucléaire, qui contribue à l’intégrité de l’enveloppe nucléaire et au transport nucléocytoplasmique sélectif. Nup205 soutient l’assemblage et la stabilité de l’architecture du pore et influence de nombreux processus liés à une régulation dépendante du transport, notamment l’export des ARN, l’import des protéines et le remodelage nucléaire associé au cycle cellulaire. En modulant l’efficacité et la sélectivité du passage des cargaisons, Nup205 peut affecter des programmes transcriptionnels et des réponses au stress reposant sur un accès nucléaire finement régulé. La dérégulation des composants du pore nucléaire, y compris des voies associées à Nup205, est pertinente pour l’étude du contrôle de la prolifération et des phénotypes cellulaires observés dans des contextes de cancer ainsi que de neurodéveloppement ou de neurodégénérescence.

Nup205 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NUP205 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nup205 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NUP205 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NUP205, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nup205. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NUP205 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nup205 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nup205 dans les cellules tumorales présentant une expression de NUP205 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.