NSP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407380

概要

SH2D3C は NSP3 をコードしており、NSP3 は SH2 ドメインおよび SH3 ドメインを含む細胞質アダプタータンパク質で、チロシンリン酸化された受容体を下流のシグナル伝達複合体へ連結するのを助けます。NSP3 は、細胞骨格の再編成、インテグリン依存的な接着、受容体介在性シグナル伝達を制御する経路に関与し、細胞移動や免疫関連の細胞挙動に影響を及ぼします。キナーゼや足場タンパク質との相互作用を介して、MAPK をはじめとするリン酸化チロシン駆動型ネットワークを調節し、活性化の閾値や細胞運動プログラムの形成に関与し得ます。アダプターを介したシグナル伝達の破綻や、接着／移動表現型の変化は炎症生物学やがん関連プロセスでしばしば示唆されるため、SH2D3C はシグナル伝達回路の機構解析研究に有用な標的となります。

NSP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSH2D3C遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SH2D3C内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SH2D3Cのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NSP3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NSP3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SH2D3C欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NSP3の機能に不可欠なSH2D3Cエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SH2D3Cゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NSP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNSP3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SH2D3C遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NSP3 HDRプラスミド（h）および NSP3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSH2D3Cホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSH2D3C標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。