Nrf3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404543-ACT

ヒトの **NFE2L3** は、cap ‘n’ collar（CNC）ファミリーに属するCNC-bZIP転写因子 **Nrf3** をコードしており、細胞ストレスへの適応や組織恒常性に関連する遺伝子発現プログラムの制御に関与します。Nrf3はレドックス状態およびプロテオスタシス（タンパク質恒常性）に関するシグナルを統合し、代謝・分化・ユビキチン–プロテアソーム系の制御に関わる転写ネットワークを調節するとともに、抗酸化応答エレメント（ARE）関連シグナル伝達とも交差します。これらの経路を介して、Nrf3は状況依存的に増殖と生存の制御に寄与し、がん生物学をはじめ、ストレス応答シグナルの破綻を特徴とする他の疾患における発現量や活性の変化という観点からもしばしば研究されています。核内での転写出力という点から、NFE2L3は環境ストレスとゲノム規模の転写リモデリングを結び付ける制御回路をマッピングするうえで有用なノードとなります。

Nrf3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NFE2L3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nrf3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NFE2L3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNFE2L3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nrf3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNFE2L3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNrf3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNFE2L3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNrf3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。