Nrf2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400017-LAC

Il gene umano **NFE2L2** codifica il fattore di trascrizione **Nrf2**, un regolatore chiave dell’omeostasi redox cellulare e della difesa contro gli elettrofili. In condizioni di stress ossidativo o da xenobiotici, Nrf2 si accumula e si lega agli **elementi di risposta antiossidante (ARE)**, inducendo geni citoprotettivi coinvolti nella sintesi del glutatione, nella rigenerazione del NADPH, nella detossificazione e nella proteostasi. Questa via si integra con il turnover ubiquitina–proteasoma mediato da **KEAP1** e presenta crosstalk con la segnalazione infiammatoria e metabolica, influenzando la funzione mitocondriale e l’autofagia. Un’alterazione della segnalazione di Nrf2 è stata associata a una diversa resilienza allo stress in contesti quali cancerogenesi, neurodegenerazione e stati infiammatori cronici, stimolando studi meccanicistici sulle dinamiche di attivazione della via.

Le particelle di attivazione lentivirale Nrf2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NFE2L2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Nrf2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NFE2L2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Nrf2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NFE2L2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.