NPT2b CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403580-ACT

SLC34A2 kodiert den natriumabhängigen Phosphattransporter NPT2b (NaPi-IIb), ein multipassiges Membranprotein, das die Aufnahme von anorganischem Phosphat über epitheliale Oberflächen vermittelt. NPT2b unterstützt die für die Nukleotidsynthese, den Phospholipidstoffwechsel und energieabhängige Signalwege erforderliche Phosphathomöostase und verknüpft damit die Transporteraktivität mit übergeordneten Stoffwechsel- und Differenzierungsprogrammen. In humanen Geweben ist die Expression von SLC34A2 besonders in der Lunge und anderen Epithelien ausgeprägt, wo eine regulierte Phosphathandhabung die alveoläre und mukosale Physiologie beeinflusst. Veränderte Funktion oder Expression von SLC34A2 wurde mit epithelialer Dysfunktion und phosphatbezogener Pathobiologie in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Membrantransport, Nährstoffsensorik und epithelialem Remodeling macht.

NPT2b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC34A2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NPT2b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC34A2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC34A2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NPT2b-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC34A2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NPT2b-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NPT2b-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC34A2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.