Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Nox5 Plasmide Double Nickase (h): sc-401223-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Nox5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Nox5 Double Nickase Plasmid (h) e il Nox5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NOX5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Nox5 Antibody (A-3): sc-518114
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Nox5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401223-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nox5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401223-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NOX5 codifica Nox5, una NADPH ossidasi attivata dal calcio che genera specie reattive dell’ossigeno (ROS) come intermedi di segnalazione nelle cellule umane. Accoppiando la dinamica del Ca2+ intracellulare a una produzione regolata di superossido e perossido di idrogeno, Nox5 influenza vie sensibili allo stato redox, tra cui MAPK e NF-κB, nonché la modulazione dei canali ionici e il rimodellamento del citoscheletro. I ROS derivati da Nox5 contribuiscono al controllo della proliferazione, della migrazione e delle risposte infiammatorie; la loro disregolazione è implicata in fenotipi associati allo stress ossidativo rilevanti per la biologia cardiovascolare e metabolica. La sua attività è spesso studiata nel contesto della segnalazione endoteliale e della muscolatura liscia, della regolazione immunitaria e di programmi trascrizionali dipendenti dal redox.
Nox5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NOX5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NOX5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NOX5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NOX5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.