NOTCH2NL Double Nickase Plasmid (h): sc-417192-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NOTCH2NL Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NOTCH2NL Double-Nickase-Plasmid (h) und NOTCH2NL Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NOTCH2NL abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NOTCH2NL: sc-100307
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NOTCH2NL Double Nickase Plasmid (h) | sc-417192-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NOTCH2NL Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417192-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NOTCH2NL kodiert ein humanspezifisches Mitglied einer Notch2-ähnlichen Proteinfamilie, das die kanonische Notch-Signalübertragung moduliert – einen Signalweg, der während der Neuroentwicklung zentral für Zellschicksalsfestlegung, Proliferation und Differenzierung ist. Durch die Beeinflussung der Aktivität von Notch-Rezeptoren und nachgeschalteter Transkriptionsprogramme trägt NOTCH2NL zur Regulation der Aufrechterhaltung neuraler Vorläuferzellen sowie zur zeitlichen Steuerung der neuronalen Differenzierung bei. Copy-Number-Variationen und veränderte Expression von NOTCH2NL-Paralogen wurden mit Phänotypen der menschlichen Gehirnentwicklung und neuroentwicklungsbedingten Erkrankungen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Untersuchungen zur kortikalen Expansion, synaptischen Reifung und zu entwicklungsbezogenen genregulatorischen Netzwerken unterstreicht.
NOTCH2NL Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NOTCH2NL-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NOTCH2NL abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NOTCH2NL-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NOTCH2NL-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.